Метод размножения in vitro сейчас является наиболее распространенным в растениеводстве и селекционно-генетических исследованиях для повышения эффективности, работ, связанных с созданием и интродукцией новых форм растений. Микроклональное размножение. позволяет получить от одного исходного растения до одного миллиона идентичных растений за полгода и размножать в необходимом количестве ценные селекционные , материалы.

Для регенерации и размножения растений стевии использовали разные органы и ткани: меристемы, почки, стебли, листья и соцветия. По данным И. И. Ильенко, для массового размножения наиболее пригодными оказались апикальные и латеральные меристемы. Регенерация и морфогенез стебельных и листовых эксплантов возможна только через образование калуса на обогащенных гормонами средах.

Для стерилизации эксплантов (точек роста или пазушных почек) применяли 0,04%-ный раствор сулемы с экспозицией в течение 30 минут и последующим 3-4-разовым промыванием в стерильной воде.

Чрезмерная стерилизация отрицательно влияла на образование побегов и рост растений. После стерилизации апикальные и латеральные почки длиной около 0,5 мм высаживали на питательную среду. Экепланты начинали развиваться, увеличиваться в размерах, в пазухах листочков появлялись небольшие латеральные почки.

Для лучшего роста и развития почек и увеличения коэффициента размножения их необходимо через 14-15 дней пересадить на свежую питательную среду .без обработки их стерилизующими веществами.

После многочисленных экспериментов и наблюдений наилучшей оказалась модифицированная И.И. Ильенко среда Гамборга. Главными составными частями этой среды являются макро- и микроэлементы с .добавлением 0,05-0,5 мг/л нафтилуксусной кислоты, 100 мг/л мезо-инозита, 03 мг/л тиамина, 03 мг/л пиродиксина, 0,5 мг/л никотинамина, 45 г/л сахарозы; уровень рН перед ав-токлавированием может составлять 5,8. В отдельных случаях, с целью быстрой и массовой регенерации растений к питательной среде добавляли 0,05-0,2 мг/л 6-бензилами-нопурина (табл. 1 в Книге).
рН среды в обеих рецептурах 5,6-6,0.

Добавление к питательной среде нафтилуксусной кислоты (НУК) и бензиламинопурина (БАП) уменьшает индукцию почкообразования и приводит к образованию калусов у основы стебля. Такое явление возникает при размещений на свежей среде листьев. При дальнейшем пересаживании таких калусов на питательную среду с минимальным количеством 6-бензиламинопурина и гиберелиновой кислоты наблюдается интенсивная регенерация почейс и стеблей.

Кусочки стебля размером 1,0-1,5 см с двумя пазушными почками базальной частью вертикально размещали в агаризованную питательную среду на глубину 0,3-0,5 см. Культивирование осуществляли при температуре 26-28 °С, относительной влажности — 70%, освещении — 3-6 килолюкс. Во время 14-часового фотопериода источником света были люминесцентные лампы, спектральный состав которых близок к дневному освещению, с небольшим тепловым излучением. Пазушные почки при таких условиях хорошо развивались, удлинялась центральная почка. Массовое образование корешков наблюдали уже через 5-7 дней после эксплантации почек, а через 14 дней растения-регенераты были готовы к пересадке. Верхнюю часть растений срезали и пересаживали на свежую питательную среду, продолжая процесс размножения. Для ускоренного размножения использовали апикальные почки с верхних междоузлий, из которых развиваются более крепкие растения. С нижних междоузлий развиваются более слабые растения с небольшими узкими листками, которые плохо укореняются.

Растения образовывали крепкую корневую систему и надземную массу с 6-8 парами листьев. Культивирование эксплантов дает возможность выращивать одновременно в одной колбе 10-12 растений. Через 20-25 дней с одной колбы получали 40-60 новых эксплантов, которые снова высаживали на свежую питательную среду.

Нижнюю часть размножаемых растений с развитой корневой системой пересаживали на специально приготовленный субстрат для доращйвания и получения рассады.

Иногда возникала необходимость культивирования меристем на жидкой среде: для оздоровления и восстановления посадочного материала при отсутствии высококачественного агара, а также для достижения высокого коэффициента размножения, которое (размножение) иногда достигало от 50 до 200 растений-регенератов с одного растения.

С этой целью подвергали испытанию минеральный состав питательной среды Мурасиге-Скуга и Гамборга при одинаковой витаминно-гормональной части и пришли к заключению, что для жидкой среды лучшее нарастание меристем происходит на среде Мурасиге-Скуга. Разработаны два варианта питательной среды, которые отличаются содержанием фитогормонов в таких соотношениях: гиберелиновая кислота — 0,5-1 мг, БАП — 0,1 мг, феруловая кислота — 9-18 мг и 1/2 дозы макро-и микроэлементов. Меристемы (верхушки почек, черенки) высаживали в пробирки или в колбы с жидкой средой.

В течение 15-20 суток культивирования меристемы вырастали в кустоподобные растения с большим количеством почек.

При выделении эксплантов из таких растений не наблюдали витрификации, растения хорошо приживалки» как на жидкой, так и на агаризованной среде. Для лучшего укоренения меристемы переносили на агаризованную среду. Но корневая система у растений, выращенных на жидкой среде, немного слабее, чем у тех, которые развивались на агаризованной среде.

Использование методов культуры клеток, тканей и органов стевии ускоряет селекционный процесс и повышает его эффективность, обеспечивает быстрое размножение и оздоровление ценных генотипов, дает возможность вести селекцию на клеточном уровне и обеспечивает сохранение генофонда.

Наш адрес: 420044, Татарстан г. Казань Ул. Восстания 18 «Б» офис 305 Телефоны: (8432) 19-64-98; 50-17-69.

(Оригинал данной статьи вы можете прочитать на сайте http://stevia-ua.narod.ru/ )